Multiplication, rooting in vitro, and acclimatization of Brassavola tuberculata Hook. (Orchidaceae), an orchid endemic to the brazilian atlantic rainforest / Multiplicação, enraizamento in vitro e aclimatização de Brassavola tuberculata Hook (Orchidaceae), uma orquídea endêmica da mata atlântica brasileira

The objective of this study was to promote the establishment of an in vitro culture of Brassavola tuberculata, testing different concentrations of naphthalene acetic acid (NAA) and 6-benzylaminopurine (BAP) on multiplication and rooting, evaluating different substrates during acclimatization, as well as the effect of in vitro treatments. After germination, the seedlings of B. tuberculata were subjected to culture on MS medium supplemented with different concentrations of NAA and BAP, and multiplication and rooting were assessed. During acclimatization, different substrates were tested: S1, Plantmax® and vermiculite (1: 1); S2, Plantmax® and grit (1: 1); and S3, dust fern. Also the effect of the in vitro culture treatments was evaluated: T1, control; T5, (2.5 µM NAA +5 µM BAP); and T7, (5 µM NAA + 0 µM BAP). The favorable balance of cytokinins promoted by treatment T5 yielded the largest number of shoots and leaves in B. tuberculata. The greatest length of leaves and roots, and highest root number were observed in the treatment T7, favored by the presence of auxin. This treatment had a positive effect with respect to plant acclimatization: T7 associated with substrate S1 provided the most suitable conditions for acclimatization of seedlings of B. tuberculata, providing greater number and length of leaves, and high survival rate.

Objetivou-se, com este trabalho, promover o estabelecimento do cultivo in vitro de Brassavola tuberculata, testando diferentes concentrações de ANA e BAP na multiplicação e no enraizamento, e avaliar diferentes substratos e o efeito dos tratamentos de cultivo in vitro na aclimatização. Após a germinação das sementes, as plântulas de B. tuberculata foram submetidas ao cultivo em meio MS suplementado com diferentes concentrações de ácido naftaleno acético (ANA) e 6-benzilaminopurina (BAP), sendo avaliados a multiplicação e o enraizamento. Foram testados diferentes substratos: S1 (Plantmax e vermiculita (1:1)); S2 (Plantmax e areia (1:1)) e S3 (pó de xaxim) na aclimatização e, posteriormente, o efeito dos tratamentos do cultivo in vitro: T1 (controle), T5 (2,5 ANA + 5 BAP) e T7 (5 ANA + 0 BAP), na aclimatização. O balanço favorável às citocininas promovido pelo tratamento T5 (2,5 µM ANA + 5 µM BAP) promoveu maior número de brotos e de folhas em B. tuberculata. O maior comprimento das folhas, das raízes e maior número de raízes foi observado no tratamento T7 (5 µM ANA e 0 µM BAP), favorável a auxina. Este tratamento apresentou efeito positivo com relação a aclimatização das plantas: T7 associado ao substrato S1, Plantmax e vermiculita (1:1) proporcionou melhores condições para a aclimatização das plântulas de B. tuberculata, propiciando maior número e comprimento das folhas, e elevada taxa de sobrevivência.

Micropropagation of Calophyllum brasiliense (Cambess) from nodal segments / Micropropagação de Calophyllum brasiliense (Cambess) a partir de segmentos nodais

Abstract Micropropagation of Calophyllum brasiliense Cambess. (Clusiaceae) is a way to overcome difficulties in achieving large-scale plant production, given the recalcitrant nature of the seeds, irregular fructification and absence of natural vegetative propagation of the species. Cultures were established using nodal segments 2 cm in length, obtained from 1-2 year old seedlings, maintained in a greenhouse. Mercury chloride and Plant Preservative Mixture™ were used in the surface sterilizing stage, better results being achieved with Plant Preservative Mixture™ incorporation in culture medium, at any concentration. Polyvinylpyrrolidone, activated charcoal, cysteine, ascorbic acid or citric acid were added to the culture medium to avoid oxidation. After 30 days of culture, polyvinylpirrolidone and ascorbic acid gave better results, eliminating oxidation in most explants. For shoot multiplication, benzylaminopurine was used in concentrations of 4.4 and 8.8 µM in Woody Plant Medium, resulting in an average of 4.43 and 4.68 shoots per explant, respectively, after 90 days. Indole-3-butyric acid and α-naphthalene acetic acid were used to induce root formation, reaching a maximum rooting rate of 24% with 20µM α-naphthalene acetic acid. For acclimatization. the rooted plants were transferred to Plantmax® substrate and cultured in a greenhouse, reaching 79% of survival after 30 days and 60% after one year.

Resumo A micropropagação de Calophyllum brasiliense Cambess. (Clusiaceae) é uma maneira de superar dificuldades para sua produção em larga escala, devido à natureza recalcitrante das sementes, frutificação irregular e ausência de propagação vegetativa natural da espécie. Culturas foram estabelecidas utilizando segmentos nodais com 2 cm de comprimento, obtidos de plantas com 1 a 2 anos de idade, mantidas em casa de vegetação. Cloreto de mercúrio e Plant Preservative Mixture™ foram utilizados durante a etapa de desinfestação, com melhores resultados alcançados com a incorporação de Plant Preservative Mixture™ ao meio de cultura. Polivinilpirrolidona, carvão ativado, cisteína, ácido ascórbico ou ácido cítrico foram adicionados ao meio de cultura para evitar a oxidação dos explantes. Após 30 dias de cultivo, o uso de polivinilpirrolidona ou ácido ascórbico proporcionou melhores resultados, eliminando a oxidação na maioria dos explantes. Para multiplicação das brotações, benzilaminopurina foi usada em concentrações de 4.4 e 8.8 µM em meio WPM, resultando em uma média de 4.43 e 4.68 brotações por explante, respectivamente, após 90 dias. Ácido indol-3-butírico e ácido α-naftaleno acético foram usados para a indução de raízes, alcançando um enraizamento máximo de 24% com o uso de 20µM de ácido α-naftaleno acético. As plantas enraizadas foram transferidas para substrato Plantmax® e cultivadas em casa de vegetação, alcançando 79% de sobrevivência após 30 dias e 60% após um ano.

Armazenamento a frio e aplicação de reguladores vegetais no enraizamento de estacas radiculares e caulinares de framboeseira / Cold storage and treatment with plant growth regulators in rooting of root and stems cutting of raspberry

The objective of this research was to verify the potential rhizogenic stem cuttings and root of raspberry (Rubus idaeus L.). Cuttings of 'Batum' cultivar was stored cold (4°C) for 10, 20 and 30 days, and a control without storage. Subsequently, the cuttings were treated with indolebutyric acid (IBA) at 0, 1000, 2000, 3000 and 4000mg L-1 and root cuttings with benzylaminopurine (BAP) at 0, 300, 600, 900, 1200 and 1500mg L-1 by 10 seconds. The cuttings were buried in 2/3 of its length in the vertical position, and root was completely buried in the horizontal position at three inches deep. It was used vermiculite medium as substrate, and these experiments were conducted in a greenhouse with 50% shading. Evaluations were made ​​75 days after planting the cuttings. It was concluded that the use of cuttings is not feasible and that the root cuttings need not be stimulated by cold storage or treatment with BAP.

O objetivo deste trabalho foi verificar o potencial rizogênico de estacas caulinares e radiculares da framboeseira (Rubus idaeus L.). Estacas da cultivar 'Batum' foram armazenadas a frio (4ºC) por 10, 20 e 30 dias, além do controle sem armazenamento. Posteriormente, as estacas caulinares foram tratadas com ácido indolilbutírico (AIB) a 0, 1000, 2000, 3000 e 4000mg L-1 e as estacas radiculares com benzilaminopurina (BAP) a 0, 300, 600, 900, 1200 e 1500mg L-1 por 10s. As estacas caulinares foram enterradas em 2/3 de seu comprimento, na posição vertical e as radiculares foram totalmente enterradas na posição horizontal, a três centímetros de profundidade. Utilizou-se vermiculita de grânulos médios como substrato, e estes experimentos foram conduzidos sob telado com sombreamento de 50%. As avaliações foram feitas após 75 dias do plantio das estacas. Concluiu-se que o uso de estacas caulinares não é viável e que as estacas radiculares não necessitam ser estimuladas pelo armazenamento a frio ou do tratamento com BAP.

Efeito do BAP no cultivo in vitro de Ocimum selloi Benth / Effect of BAP on in vitro culture of Ocimum selloi Benth

Visando promover a proliferação de brotações em segmentos apicais e nodais de Ocimum selloi em diferentes concentrações de BAP, plantas jovens de 60 dias serviram de doadoras de segmentos apicais e nodais. Os segmentos foram inoculados em meio MS preparado com a metade da concentração dos sais, e acrescido de 1,5% de sacarose e diferentes concentrações de BAP. O experimento foi conduzido no delineamento fatorial, 3 x 4, sendo 3 as posições dos segmentos de O. selloi (segmento apical, primeiro e segundo segmentos nodais) e 4 concentrações de BAP (0 - controle; 2; 4 e 6 mg L-1). Aos 30 dias, foram avaliados o número, comprimento e biomassa fresca e seca de brotos e raízes. Os primeiros e segundos segmentos apresentaram melhores resultados na indução de brotos de O. selloi, 7 e 8 brotos/explante, nas diferentes concentrações de BAP; porém, não houve formação de raízes na presença da citocinina. Nas condições testadas, recomenda-se o uso do primeiro e segundo segmento nodal suplementando o meio de cultivo com BAP para a proliferação in vitro de brotações de O. selloi.

The present study was undertaken to develop the proliferation of sprouts in apical and nodal segments of Ocimum selloi with different BAP levels. Young plants aged 60 days were used as donors of nodal and apical segments. The segments were inoculated in MS medium at half the concentration of salts supplemented with 1.5% of sucrose and different BAP levels. The experiment was in 3 x 4 factorial arrangement, 3 positions of O. selloi segments (apical segment; first and second nodal segment) and 3 BAP levels (0 - control; 2; 4 and 6 mg L-1). After 30 days, the number, the length, and the fresh and dry biomass of sprouts and roots were evaluated. The first and the second segments showed better results in inducing O. selloi sprouts, 7 and 8 sprouts/explant, at the different BAP levels, but there was not root formation in the presence of the cytokinin. Under the tested conditions, use of the first and the second nodal segments is recommended in addition to supplementing the culture medium with BAP for in vitro proliferation of O. selloi sprouts.

Diodos emissores de luz e concentrações de BAP na multiplicação in vitro de morangueiro / Light-emitting diodes and BAP concentrations in the in vitro strawberry multiplication

Realizou-se um estudo para avaliar o efeito de fontes de luz na micropropagação de morangueiro, com níveis crescentes de BAP no meio de cultivo. Para tanto, inocularam-se gemas de brotações da cultivar 'Sabrosa' em meio MS com 30g L-1 de sacarose, 100mg L-1 de mio-inositol, 7g L-1 de ágar e BAP (0; 0,3; 0,6; 0,9; e 1,5mg L-1), em pH 5,8. Os explantes foram cultivados a 25+2°C, com 16 horas de fotoperíodo e luminosidade de 20µmol m-2 s-1, esta última fornecida por diferentes fontes de luz (LED azul-EDEB 3LA1, LED verde-EDET 3LA1, LED vermelho-EDER 3LA3, lâmpada fluorescente Growlux e lâmpada fluorescente branca). Os tratamentos foram dispostos em delineamento inteiramente ao acaso em um fatorial 5x5 (concentrações de BAP x fontes de luz), com seis repetições. O experimento foi repetido em três subcultivos sucessivos de 35 dias cada. Nestes avaliaram-se o número de brotações por explante e a altura das brotações. Ao final do terceiro subcultivo, determinaram-se, ainda, as concentrações de carotenoides e de clorofilas a e b, independentemente do nível de BAP. Maior número de brotações por explante foi obtido sob LEDs vermelhos e verdes. Concentrações de BAP no meio de cultura entre 0,82 e 1,22mg L-1, dependendo da fonte de luz, proporcionaram maior multiplicação in vitro de brotações. Sob todas as fontes de luz foram obtidas brotações de maior comprimento em meio isento de BAP. Brotações cultivadas sob LEDs vermelhos apresentaram maior quantidade de pigmentos fotossintéticos, enquanto aquelas sob LEDs verdes e lâmpadas Growlux apresentaram a menor.

The objective of this research was to evaluate the effect of different sources of light in strawberry micropropagation, under increasing levels of BAP in culture medium. 'Sabrosa' shoots were inoculated in MS medium supplemented with 30g L-1 sucrose, 100mg L-1 myo-inositol, 7 agar g L-1 and BAP (0; 0.3; 0.6; 0.9; e 1.5mg L-1), pH 5.8. The explants were cultivated at 25+2°C, 16 hours photoperiod and 20µmol m-2 s-1. The luminosity was supplied by different sources of light (blue-EDEB 3LA1 LED, green-EDET 3LA1 LED, red-EDER 3LA3 LED, Growlux fluorescent lamp and white fluorescent lamp). The experimental design was a factorial entirely randomized (5 concentrations of BAP x 5 light sources) with six replications. The experiment was repeated in three successive subcultures of 35 days each, being evaluated the shoot number per explant and shoot height. The carotenoids and chlorophyll a and b determinations were carried out after the third subculture, independently of BAP concentration. Shoot number per explant was higher under red and green LEDs. BAP concentrations between 0.82 and 1.22mg L-1 in culture medium showed higher multiplication rate depending on the light source. Shoot length was highest in culture medium without BAP under all light sources. Shoots cultivated under red LEDs showed higher concentration of photosynthetic pigments, while those under green LEDs and Growlux light bulbs showed the lowest.

Crescimento de plantas de Salvia officinalis sob ação de reguladores de crescimento vegetal / Growth of Salvia officinalis plants under action of plant growth regulators

O objetivo deste trabalho foi estimar os parâmetros da análise de crescimento em função de diferentes reguladores vegetais aplicados na parte aérea de plantas de Salvia officinalis L. Para tanto,o experimento foi instalado em casa de vegetação do Departamento de Botânica, Instituto de Biociências, da Universidade Estadual Paulista, Botucatu, SP. Os tratamentos consistiram na pulverização da solução de 100mg L-1 de ácido giberélico (GA3); 100mg L-1 de benzilaminopurina (BAP); 100mg L-1 de ácido 2-cloroetil-fosfônico (ethephon); Stimulate® a 2 por cento (90mg L-1 de cinetina, 50mg L-1 de ácido giberélico e 50mg L-1 de ácido indolilbutírico) e água (testemunha). As aplicações foram realizadas em três épocas, aos 15, 25 e 35 dias após o transplante (d.a.t.) e o crescimento foi avaliado em cinco épocas de coletas a intervalos de 21 dias, sendo a primeira realizada aos 47 (d.a.t.). Foram determinados os parâmetros fisiológicos da análise de crescimento: razão de área foliar (RAF), área foliar específica (AFE), taxa assimilatória líquida (TAL) e taxa de crescimento relativo (TCR). Os resultados mostram que os reguladores de crescimento vegetal influenciaram os parâmetros fisiológicos da análise de crescimento. As plantas tratadas com BAP apresentaram maiores valores de RAF aos 47 d.a.t., já as plantas tratadas com GA3, a TAL apresentou aumento até o 131 d.a.t. A TCR é decrescente para todos os tratamentos com reguladores de crescimento vegetal testados e a testemunha.

The objective of this study was to estimate the effects of different plant regulators on the index growth analysis application of sage plants. An experiment was conducted in a greenhouse with controlled temperature and relative humidity, at the Departmento de Botânica, Instituto de Biociências, Universidade Estadual Paulista, UNESP, Botucatu, SP, Brazil. The experimental design was completely randomized, with five treatments containing three replicates. Treatments consisted of the spraying of the solution of 100mg L-1 of gibberellic acid (GA3); 100mg L-1 of benzylaminopurine (BAP); 100mg L-1 of 2-chloroethyl phosphonic acid (ethephon); Stimulate® at 2 percent (90mg L-1 of kinetin, 50mg L-1 of gibberellic acid and 50mg L-1 of indolylbutyric acid) and water (control). Applications of plant growth regulators were performed in 3 times, at 15, 25, and 35 days after transplanting, and growth was evaluated in five successive harvests at 21-day intervals, performed at 47, 68, 89, 110, and 131 days after transplanting. The following growth index were determined: leaf area ratio (LAR), specific leaf area (SLA), net assimilation rate (NAR), and relative growth rate (RGR). These results suggest that the plant growth regulators influence the index growth analysis. The plants treated with BAP presented increase values of LAR to the 47 days after transplanting. The plants treated with GA3 to NAR presented increase until the 131 days after transplanting. The RGR is decreasing for all the treatments with vegetal regulators tested and the control.

Efeitos de citocininas sobre a anatomia foliar e o crescimento de Annona glabra L. durante o cultivo in vitro e ex vitro / Effects of cytokinins on the leaf anatomy and growth of Annona glabra L. during in vitro and ex vitro culture

O efeito de diferentes fontes de citocininas durante o cultivo in vitro de A. glabra sobre características anatômicas de folhas e crescimento das plantas foi avaliado neste trabalho. BAP (6-benzilaminopurina) e KIN (cinetina) induziram aumento na espessura do mesofilo, enquanto que ZEA (zeatina) promoveu aumento na densidade e no índice estomático e no desenvolvimento do sistema vascular de folhas. A utilização de KIN e BAP proporcionou maior desenvolvimento e taxa de sobrevivência das plantas durante as fases de enraizamento e aclimatização.

The effect of different sources of cytokinins during the in vitro cultivation of A. glabra on anatomical characteristics of leaves and plant growth was evaluated in this work. BAP (6-benzilaminopurine) and KIN (kinetin) induced an increase in leaf mesophyll thickness, while the ZEA (zeatin) promoted an increase in density and stomatic index and development of leaves vascular system. The utilization of KIN and BAP improved higher plant development and survival rate during the acclimatization and rooting phases.

Germinação e propagação in vitro de porongo / In vitro germination and propagation of bottlegourd

O objetivo foi desenvolver um protocolo de germinação e propagação in vitro de porongo (Lagenaria siceraria). Foram conduzidos experimentos de desinfestação e germinação de sementes inteiras e sem tegumento. O meio MS suplementado de 30g L-1 de sacarose foi utilizado para a propagação de explantes cotiledonares, ápices caulinares e segmentos nodais. Sementes inteiras de porongo somente germinaram sobre papel germitest. Sementes sem tegumento, desinfestadas pela imersão em álcool 70 por cento por 1min. e em solução de 3 a 4 por cento de hipoclorito de sódio por 10min, germinaram em meio de cultura contendo água destilada e 30g L-1 de sacarose, possibilitando o estabelecimento in vitro plântulas de porongo. Explantes cotiledonares produzem brotações adventícias, e ápices caulinares e segmentos nodais crescem e enraízam em meio MS, sem a adição de reguladores de crescimento. A organogênese direta a partir de explantes cotiledonares associada à regeneração de ápices caulinares e segmentos nodais facilita a propagação in vitro do porongo, o que oferece uma excelente oportunidade para explorar a cultura de tecidos, entre outras aplicações, como ferramenta auxiliar no melhoramento genético desta espécie.

The objective was to develop a protocol of 'in vitro' germination and propagation of bottlegourd (Lagenaria siceraria). Experiments of 'in vitro' disinfestation and germination were carried out with intact seeds and seeds without tegument. Cotyledonary explants, apical and nodal segments were propagated in MS medium, supplemented with 30g L-1 of sucrose. Bottlegourd intact seeds only germinated on germitest paper. Seeds without tegument, disinfected in alcohol 70 percent for 1min. and sodium hypochlorite (3 to 4 percent) for 10min., geminated in a culture medium of distilled water and 30g L-1 of sucrose, making possible the 'in vitro' establishment of bottlegourd seedlings. Cotyledonary explants produce adventitious shoots and apical and nodal segments grow and root in MS medium without growth regulators. Direct organogenesis of cotyledonary explants and regeneration of apical and nodal segments make easy bottlegourd 'in vitro' propagation and offer a good opportunity to use tissue culture as a complementary tool for breeding and genetics or other applications.

Influência da benzilaminopurina (BAP) NA multiplicação in vitro de kiwi (Actinidia deliciosa) / The influence of benzylaminopurine in the in vitro multiplication of kiwi (Actinidia deliciosa)

Este experimento foi conduzido no Laboratório de Cultura de Tecidos da EMBRAPA/CPACT, Pelotas, RS, com o objetivo de estudar a influência de diferentes concentrações de 6-benzilaminopurina (BAP) na multiplicação in vitro de kiwi (Actinidia deliciosa), cv. Tomun. Utilizou-se o meio de cultura MS, acrescido de sacarose, mio-inositol, ágar e das seguintes concentrações de BAP: 0,0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 e 2,5 mg/l. Os explantes foram constituídos de microestacas provenientes da coleção in vitro do Laboratório, com aproximadamente 10mm de comprimento. Verificou-se que, para o número e comprimento de brotações, número de gemas e folhas a concentração em torno de 1,5mg/l de BAP proporcionou os memores resultados. Nas condições em que o trabalho foi realizado, pode-se concluir que o BAP foi eficiente na multiplicação in vitro de kiwi, cv. Tomuri.

This trial was carried out in the Tissue Culture Laboratory at EMBRAPA/CPACT, Pelotas, RS, Brazil, aiming to study the influence of different 6-benzylaminopurine (BAP) concentrations in the in vitro multiplication of kiwi, cv. Tomuri. A MS medium was used adding sucrose, myo-inositol, agar and concentrations of BAP as follows: 0.0; 0.5; 1.0; 1.5; 2.0 and 2.5mg/l. The explants consisting of microshoots of 10mm length were obtained from the in vitro collection at the laboratory. The best results of bud and shoot numbers, shoot length and number of leaves were obtained using about 1.5mg/l BAP. Results of this experiment demonstrated that BAP is efficient in the in vitro multiplication of kiwi, cv. Tomuri.